高温蒸汽灭菌的温度一般在100℃以上，具体常用121℃。高温蒸汽通过饱和水蒸气产生压力，穿透物体内部破坏微生物蛋白质结构，达到灭菌效果。这个温度既能杀灭细菌繁殖体，也能灭活芽孢。

高温蒸汽灭菌选择121℃的原因有：1. 蒸汽含水量高，高温穿透力强；2. 压力容器内温度可达121℃（标准大气压下100℃），压力每增加1kg/cm²，温度升高约2.5℃；3. 灭菌时间15-30分钟可灭活所有微生物，包括耐高温的芽孢。实验数据显示，121℃持续20分钟可灭活99.9999%的微生物，灭菌效果比单纯100℃提高3倍以上。实际应用中，压力蒸汽灭菌器通过控制温度和时间确保灭菌彻底，避免温度不足导致灭菌失败。