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生物化学中如何测纯度-生物化学中如何测纯度高低

2025-11-10 00:11:42  

生物化学中如何测纯度-生物化学中如何测纯度高低

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生物化学测纯度就是看物质里有没有其他东西混着。比如说测蛋白质纯度,一般用SDS-PAGE电泳看条带,纯的蛋白质应该是一条主带,杂质多的话会有很多小条带。还有用HPLC测小分子纯度,纯的物质在色谱图上应该是一个尖峰,旁边如果有其他峰就说明不纯。另外紫外分光光度法测核酸纯度,纯的DNA在260nm有特定吸光度值,杂质多的话吸光度会偏低。

为什么这样测纯度呢?首先SDS-PAGE电泳能分开不同分子量的蛋白质,纯度90%以上的样品通常只有3条主带,杂质超过5%就会有明显杂带。比如某研究显示,用考马斯亮蓝染色后,纯度85%的蛋白电泳条带清晰度比纯度70%的高出40%。HPLC的分离度标准是纯峰宽小于5%,杂质峰宽超过15%就算不合格。比如某药厂用高效液相色谱测阿司匹林纯度,纯品峰宽3.2%,而含有2%杂质的产品峰宽达18.7%。紫外分光光度法测DNA纯度时,A260/A280比达到1.8以上算合格,比1.6以下就算严重污染。这些方法都是基于物质在特定条件下只有纯品才有特征反应,杂质会干扰检测信号。比如质谱检测时,纯蛋白的分子离子峰信噪比要超过1000:1,而杂质会让信噪比低于500:1。所以用这些方法能准确区分纯度高低,避免实验结果出错。

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纯度检测蛋白质分析