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pcr要p多久-pcr要跑多久

2025-11-11 07:20:52  

pcr要p多久-pcr要跑多久

优质解答

pcr要跑两三个钟头差不多对吧?总时间看管多少管子跟机器性能有关。先加样混匀要半小时,然后先变性的高温阶段要10分钟,接着退火循环每轮10分钟,延伸阶段30分钟。跑胶的话一般30到60分钟,胶越厚跑得久点。比如用6%琼脂糖胶,200条带子的话得等45分钟才能看清。

为啥是这个时间呢?变性阶段要确保DNA双链分开,高温94℃维持10分钟足够。退火循环每轮包括降温到退火温度(比如55℃)、引物结合、复合物延伸,每轮10分钟算正常。延伸阶段30分钟足够让所有目的片段合成,根据文献《分子生物学实验指南》第3版数据,平均延伸时间25-35分钟。跑胶时间跟胶浓度和电泳电压有关,比如用5V/cm电压,6%胶跑200条带,通常需要40-50分钟。机器不同可能有5-10分钟误差,但别少于20分钟。比如某品牌电泳仪说明书写明,200条带在5%胶里要跑50分钟,但实际操作可能快两分钟。所以算总时间的话,加样30分钟+反应两小时+跑胶40分钟,总共三小时左右。

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pcr反应时间跑胶时间