测序中barcode原理就像给每个样本贴快递单号，测序仪通过识别单号确定该读多少条数据给谁。但实际操作时，快递单号（barcode）和目标DNA会混在一起，如果单号对应的DNA不够多，测序仪就会抢着读单号，导致目标DNA被漏掉。比如有研究显示，当barcode浓度低于100ng/μL时，错误率超过30%，相当于每10次测序就有3次失败。

这是因为测序仪有个“贪吃”特性，它优先读取浓度高的序列。比如先看到单号浓度高就猛读单号，目标DNA浓度低就被忽略。更麻烦的是，如果单号DNA扩增失败（比如引物不匹配），测序仪就会读乱码，把错误信息当目标数据。大前年《分子生物学》期刊数据指出，有18%的测序失败案例是因为单号扩增不充分，而污染导致的错误占7%。就像快递单号被贴错地址，或者单号本身被涂改，结果快递员送错包裹。