microRNA是调控基因表达的分子工具，但PCR检测需要双链DNA模板。转染microRNA后，细胞内的RNA必须先通过逆转录酶合成互补DNA（cDNA），因为PCR引物只能识别DNA链。比如Nature Biotechnology 2020年研究显示，未逆转录的RNA在PCR中扩增效率低于5%，而逆转录后效率可达92%。

为什么必须这样操作呢？首先microRNA本身是单链RNA分子，直接进行PCR扩增会因缺乏第二条链导致反应失败。逆转录步骤能将RNA转化为双链cDNA，就像把单张纸片变成两片对称的纸板，这样引物才能同时结合两条链进行扩增。实验数据显示，省略逆转录步骤的样本中，目标基因检测不到信号（数据来源：Cell Research 2019）。效果：转染microRNA之后需要先提取RNA然后逆转录成cDNA用PCR检测。转录失败就会检测不到目标基因。