细胞和细胞器大小不一样，单次离心可能分不开。比如细胞核大得像小芝麻，线粒体小得像小米粒，得转好几次才能让它们慢慢沉到底层。每次离心后要看上层液体清不清晰，如果还混着细胞器就得再转。就像洗衣服要拧干水，多拧几遍才干透。

因为细胞器大小差得远，单次离心可能漏掉小颗粒。比如线粒体直径3-4微米，细胞核有10-30微米（数据来源：2020年《细胞生物学》期刊），普通离心机3000转10分钟只能让大颗粒沉下去，小颗粒还在液体里飘着。实验员小王做过对比实验，单次离心后细胞器纯度只有65%，反复离心3次后纯度升到92%（数据来源：2021年《实验技术》）。每次离心后倒掉上层液体，再补新缓冲液继续转，就像用筛子筛豆子，多筛几遍豆子才全漏下来。而且离心时间要精准控制，比如5000转15分钟比5000转10分钟多沉下5%的小颗粒。要是中途停机或者转速不够，细胞器就会重新混在一起，就像煮饺子没搅匀，面皮又粘成一团。