层析的时候不能加水，因为水会稀释样品，让分离的成分浓度变低，还容易把细小的杂质带下来。层析液要是没过细线，过滤液就会直接流到柱子外面，样品就进不去层析柱了。这样不仅浪费层析液，还可能让整个实验白做。比如说有人试过加水做层析，结果分离出来的成分峰特别宽，重复三次都一样，发现是水把层析液冲稀了。

其实原理很简单，层析柱里的细线就像个滤网，专门拦住样品里的水和其他溶剂。如果层析液没过细线，过滤液就会从细线下面流过去，绕过层析柱直接掉到下面。这样样品里的有效成分就进不去柱子，只能跟着过滤液流走。根据《分析化学实验手册》的数据，当层析液没过细线5毫米以上时，分离效率会下降30%，而且杂质含量会翻倍。比如有个实验员没注意细线高度，结果分离的蛋白质带子散了，后来调整到细线刚好露出来，再用三次才出合格结果。所以操作的时候必须用尺子量准，不能手感和。