tmlc就是DNA模板链的长度，Tm值是DNA链在加热时解开的关键温度。比如30分钟的PCR实验，温度升到94℃左右就是Tm值，这时候双链DNA会变成单链。Tm值越大，DNA越稳定，就像煮鸡蛋水开到100℃不容易熟，而Tm值低的话温度稍微高一点DNA就散开了。影响Tm值的主要是三点：碱基对里的鸟嘌呤和胞嘧啶比例（GC含量），溶液里的盐分浓度，还有DNA链的长度。比如GC含量每增加10%，Tm值会升5-10℃；盐浓度每增0.1M，Tm值就降5-10℃。举个例子，纯水中的10条碱基对DNA的Tm值大概50℃，而同样长度但GC含量40%的DNA，Tm值能到65℃以上。

为什么得这么算呢？首先鸟嘌呤和胞嘧啶配对时需要两个氢键，比腺嘌呤和胸腺嘧啶配对多一个氢键。比如GC含量30%的DNA每条碱基对平均有1.5个氢键，而GC含量50%的有2个氢键。氢键越多，解开需要的热量就越高。盐浓度里的钠离子会帮DNA链抓住碱基对，比如生理盐水浓度0.9%时，每增加0.1M盐浓度，相当于给DNA加了个“保镖”，这时候Tm值反而会降5-10℃。比如实验室常用的10倍缓冲液里盐浓度0.165M，这时候10条碱基对的Tm值可能只有45℃，而纯水里的同长度DNA能到55℃。还有条数据是，当DNA长度超过50个碱基对时，每增加10条，Tm值会升2-3℃，但超过100条后升幅会变小。比如100条碱基对的DNA在GC含量40%时，Tm值大概75℃，而200条的同GC含量DNA，Tm值可能到85℃左右。不过实际实验中，如果DNA太短（比如20条以下），温度波动1℃就可能影响结果，这时候得用引物设计软件算精确值。