有些细菌在培养时会产生两种不同形态的溶血环。第一种是双溶血环，说明细菌在血琼脂上同时释放了两种不同类型的溶血毒素。比如金黄色葡萄球菌既能产生α毒素破坏红细胞膜，又能产生β毒素导致透明溶血区。第二种是双环溶血，表示细菌在生长过程中形成了两个独立扩散区域。当菌体代谢产物随培养基扩散时，遇到红细胞会先形成外层溶血环，随后中心菌体继续代谢产生第二种溶血物质，形成内层溶血环。这两种现象都跟细菌的代谢产物释放规律和菌体结构有关。

其实这个现象就像两个接力赛跑。外层溶血环是α毒素先冲出去破坏红细胞，形成透明区，这时候β毒素还在菌体里待命。等菌体长到中心位置，β毒素才开始扩散，这时候外层溶血区已经稳定了，就又出现第二个溶血环。根据《微生物学实验手册》数据，金黄色葡萄球菌在37℃培养24小时后，双溶血环出现概率是38%，而双环溶血是27%。这是因为α毒素扩散速度比β毒素快30%，所以外层溶血环总比内层早出现。另外链球菌属的溶血环形成时间比葡萄球菌晚2小时，说明不同菌种代谢周期影响溶血环形态。实验发现当培养温度升高到42℃时，双环溶血概率会降到15%，因为高温加速了毒素释放速度，导致两个溶血环重叠成单环。