核酸在紫外光下会吸光特定波长，所以检测时用260nm和280nm的波长。DNA和RNA在260nm处吸光最强，因为它们的碱基对含有大量共轭双键结构，就像吸光板在特定位置咬住光子。而280nm处吸光主要来自蛋白质中的芳香族氨基酸，所以同时检测这两个波长能更准确判断核酸含量。比如实验室里用分光光度计测样本，先调260nm看OD值，再调280nm核对有没有杂质干扰。

为啥必须用这两个波长呢？首先得看核酸的紫外吸收特性，根据比耳定律，吸光度跟浓度成正比。实验数据证明，在260nm波长下，DNA的吸光度每增加1.0，浓度就对应50μg/mL。但280nm吸光值如果超过260nm的1.2倍，说明混了蛋白质，这时候得重新处理样本。比如某次测病毒RNA，OD260是0.35，OD280是0.28，比值1.25，结果发现核酸纯度只有85%。另外波长选择还跟仪器有关，国产分光光度计在250-300nm之间稳定性最好，所以选中间值260nm。不过要注意环境光干扰，实验室必须拉窗帘再测，否则OD值会虚高0.1以上。