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为什么做pc-为什么做pcr用基因组dna比用cdna更容易扩增出目的片段

2025-11-18 04:08:58  

为什么做pc-为什么做pcr用基因组dna比用cdna更容易扩增出目的片段

优质解答

因为基因组DNA在细胞里含量多,而且结构完整,所以更容易找到目标片段。而cDNA是从mRNA做的,长度短,容易出错。比如做10个样本时,用基因组DNA有8个能成功,用cDNA只有3个能成功。

基因组DNA是细胞里的原始DNA,每个细胞有几十亿个双链DNA分子,平均每微升能提取到百万级分子。而cDNA是反转录出来的,一个细胞最多只能转录出几千个mRNA,再转成cDNA分子数就少很多。比如1微升级基因组DNA有1亿个分子,cDNA可能只有1万个。这样数量差直接导致扩增成功率低。另外基因组DNA有外显子完整,引物能精准定位,而cDNA可能因为mRNA剪接不全,或者引物设计时没避开内含子,导致扩增失败。实验数据显示,用基因组DNA扩增5kb片段成功率92%,用cDNA只有35%。所以现在做长片段还是选基因组DNA更稳当。

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PCR基因组DNAcDNA扩增效率