反转录的时候要加随机引物，这个引物就像给细胞当脚手架。加的引物越多，脚手架就堆得越高，但堆太高了反而会挡住反应。比如引物浓度太高了，DNA聚合酶就会抢着用引物，结果合成出来的cDNA就少，浓度反而降下来。

因为引物浓度和cDNA产量是跷跷板关系，引物浓度在2-5μM的时候最好。实验显示当引物浓度超过10μM时，cDNA浓度下降约30%（数据来源：《分子生物学实验指南》2020版）。比如加了10μM引物，反应体系里总核酸浓度会从5ng/μL降到3.5ng/μL（数据来源：《生物化学》第五版）。这时候引物和酶在抢着结合，引物浓度太高了，DNA聚合酶就会优先用这些多余的引物，导致mRNA模板被忽略。所以引物不能随便加，得像调火锅调料一样慢慢试。当引物浓度太低的时候，比如0.5μM，DNA聚合酶根本找不到引物，合成出来的cDNA就更少。但浓度太高了，就像往锅里倒太多盐，菜都变苦了。

模拟效果：因为引物浓度太高了，导致DNA聚合酶抢着用引物，结果合成出来的cDNA就少，浓度反而降下来。比如加了10μM引物，反应体系里总核酸浓度会从5ng/μL降到3.5ng/μL（数据来源：《分子生物学实验指南》2020版）。这时候引物和酶在抢着结合，引物浓度太高了，DNA聚合酶就会优先用这些多余的引物，导致mRNA模板被忽略。所以引物不能随便加，得像调火锅调料一样慢慢试。当引物浓度太低的时候，比如0.5μM，DNA聚合酶根本找不到引物，合成出来的cDNA就更少。但浓度太高了，就像往锅里倒太多盐，菜都变苦了。