DAPI染色一般要等10到15分钟，酵母复染得等30到60分钟。先让DAPI把细胞核染成蓝色，等染料渗透均匀了再洗掉多余染料。酵母细胞膜厚，复染时得让染料慢慢进去，时间拉长才能看清楚结构。

为什么这么定时间？DAPI浓度高的话，染色时间可以缩短到10分钟，但浓度低可能得等15分钟让染料充分结合。酵母复染时，固定剂用了甲醛或者乙醇，细胞膜会变硬，所以得等30分钟让染料钻进去。比如有实验显示，用0.1μg/mL DAPI染色10分钟，细胞核就蓝了；酵母用Gibco的染料，复染35分钟后荧光强度最高。时间太短染不透，太长容易让染料跑掉。比如有人试过15分钟复染，酵母的假菌丝还看不清；等到45分钟，结构就清晰了。所以得根据染料浓度和样本类型调整时间，多试几次才能找到最佳点。操作时，染色时间误差别超过5分钟，否则结果可能乱。