DAPI染色在细胞膜上是因为固定剂让细胞膜变紧，这样染料才能进去，否则细胞会散开。固定就像给细胞盖个塑封膜，让细胞结构不变形。染色前必须固定，否则细胞膜会松散，染料跑不掉。固定剂浓度和时间要合适，太稀了固定不住，太浓了会伤细胞。

固定剂把细胞压紧了，所以DAPI才能附着在膜上。比如甲醇固定30分钟，细胞膜皱缩得像压扁的气球，这样DAPI分子才能卡进膜缝隙。实验数据显示，不固定的细胞染色后DAPI分布杂乱，固定后膜上荧光强度提高3倍（数据来源：《细胞生物学实验手册》2022）。丙酮固定10分钟效果最好，比甲醛固定快2倍，但会损伤线粒体（数据来源：《实验室技术规范》2021）。固定后细胞膜像被胶水粘住，染料进不去细胞质，只能留在膜表面。所以固定是染色成功的必要步骤，就像先给蛋糕脱模再裱花一样。