反转录大概需要1-2小时左右，浓度要调到1-5ng/μL。温度一般开37度，有时候加个冰浴。如果浓度太低可能得补点RNA，太高了反应会乱套。关键要保证样本没被污染，试剂新鲜。

为啥是这个时间这个浓度呢？首先温度37度是RNA酶最活跃的温度，但反转录酶怕热，所以得低温启动。根据《分子生物学方法》数据，1μg RNA在37度下反转录1小时产率最高，浓度低于1ng/μL容易出错。有个实验显示浓度超过5ng/μL时，产物错误率翻倍。冰浴主要是让酶活性降下来，避免提前反应。比如有个案例，有人浓度调到3ng/μL，37度反应30分钟，结果产物少了一半。所以得按试剂说明书来，别自己乱调。