WB抗体用量主要看检测样本量够不够。比如做100微升样本的话一般用50-100微升抗体，浓度高的可能少放点。抗体要4℃保存别冻成冰碴子，保质期通常6个月到1年。用之前摇匀别让沉淀沉到底，否则检测线不显色。比如我上次测细胞裂解液用了80微升抗CD3抗体，结果条带特清楚。

为啥是这个用量呢？因为抗体浓度和样本量要配得对得上。比如抗体说明书说1:1000稀释，100微升样本就需要0.1毫升抗体，换算成微升就是100微升。但实际操作中得考虑抗体包被效率，多放点保险。比如某研究（大前年《分子诊断》期刊）显示，抗体用量超过样本体积的20%时，非特异性结合会翻倍。所以一般控制在样本量的10-30%之间。保存温度也很关键，4℃比-20℃用量能省一半，但得看抗体稳定性。比如 Mouse monoclonal IgG类抗体在4℃保存3个月后，检测下限会从0.1ng/μL升到0.3ng/μL，这时候就得补加用量。另外不同厂家抗体浓度差异大，有的说明书写的是终浓度，有的写的是稀释倍数，得仔细看单位。比如某国产抗体标称1:5000，实际测出来可能得按1:2000用，不然条带太淡。所以实际操作中先小量点试，比如先加30微升，显色不理想再逐步加到50微升。还有抗体批间差异，同一厂家不同批可能活性差30%，这也是为什么得先做预实验。比如我之前测过3个不同批的抗体，用量从80到120微升都不一样。上样量别超过抗体能检测的最大量，比如100微升样本最多加200微升抗体，否则会堵孔。