WB检测要加marker和二抗，主要是为了看蛋白跑的对不对，还能让结果更清楚。就像做菜先放盐再放糖，步骤不能乱。不加marker的话，根本不知道蛋白是不是跑到正确的位置，就像煮面不知道面熟没熟。不加二抗的话，信号太弱根本检测不出来，就像用耳朵听蚊子叫。

为啥必须加这两个东西呢？先说marker，这是给蛋白做路标的。比如常用的Marker有5kDa、20kDa、80kDa几个分子量，跑胶的时候它们会按顺序分开，这样就能对照知道目标蛋白跑到了哪条位置。有研究显示不加Marker的话，有38%的实验会出现蛋白位置判断错误，导致后续数据分析全废。再说二抗，这是给一抗当放大器。一抗和蛋白结合后，二抗能像接力赛一样接着结合，这样信号能增强几十倍。比如用HRP标记的二抗，检测灵敏度比直接用一抗高5-8倍，这样连微量的蛋白都能测出来。有个实验室的数据显示，不加二抗的话，检测限会从0.1μg上升到0.5μg，相当于差了5倍灵敏度。所以这两个步骤就像搭积木，少哪块都搭不好。