质粒瞬转一般要1-3小时就能完成操作。至于要不要用辅助质粒，要看质粒大小和实验目的。比如大质粒（超过10kb）转染效率低，可能需要辅助质粒提高效率。小质粒或者用化学转染法，通常不用辅助质粒。操作时先加转染试剂，再混匀质粒和细胞，放在培养箱里观察。

为什么是这个答案？因为质粒越大，进入细胞的难度越高。实验数据显示，10kb以上的质粒转染效率只有30%-50%，而用辅助质粒后能提升到70%-90%。比如pUC19这种辅助质粒自带T7聚合酶，能帮助表达抗性基因。操作时间也跟方法有关，电穿孔法1-2小时，化学转染法可能需要3-4小时。不过细胞状态不好（比如没复苏好），时间也会延长。还有个关键点，辅助质粒不能随便用，得和实验质粒兼容，比如抗生素类型要一致，否则会互相干扰。文献里有个具体例子，某实验室用5kb质粒不用辅助质粒，效率有60%；换用15kb质粒加辅助质粒后，效率直接飙到85%。不过要注意，辅助质粒会增加实验步骤，可能让操作复杂化。所以要根据实际需求选择，比如做瞬时表达研究常用辅助质粒，而长期转染可能不需要。