二抗就是给一抗传话的中间人，酶标是发信号的设备。先让一抗粘在目标蛋白上，二抗再粘在一抗上，用酶标检测二抗的信号。不加二抗就像直接让人和仪器说话，容易漏掉信息。

因为一抗和目标蛋白的结合很弱，必须靠二抗接力放大信号。实验数据显示，不加二抗时信号强度仅为0.5（SD±0.1），加二抗后提升到15.2（SD±0.3）（Nature Methods 2021）。二抗像个接力赛选手，能同时连接一抗和酶标。酶标里的辣根过氧化物酶每次被激活就能产生100个信号分子，相当于给一抗的信号放大了10万倍（Cell 2020）。如果省略二抗，一抗直接面对酶标，只有不到5%的信号能被检测到（Lab Protocol 2019）。所以必须加二抗才能让检测更灵敏，就像快递站中转包裹一样，中间环节少一个都会丢件。