培养基放冰箱主要是为了延长保质期，但放久了容易变质。冰箱冷藏能减缓细菌繁殖速度，不过时间太长的话，残留的微生物可能重新活跃起来，或者培养基成分发生物理化学变化，比如蛋白胨分解产生气体，琼脂融化后影响凝固性。实验前发现培养基长霉或者表面有浑浊物，说明已经不能用了。

为什么冰箱保存的培养基放久了会出问题呢？首先得看保存条件是否符合标准。根据《微生物学实验技术规范》，普通琼脂培养基在4℃下最多保存14天，而肉汤培养基这类液体培养基冷藏超过7天就可能变质。数据表明，超过保存期的培养基中，大肠杆菌超标概率达到63%（王等，2022），因为冰箱不是绝对无菌环境，残留的微生物会随温度回升加速繁殖。培养基中的营养成分会逐渐分解，比如氨基酸氧化产生氨，导致pH值下降，影响菌落形态观察。实验记录显示，保存15天的培养基接种后菌落直径比新鲜培养基平均大2.3毫米（李，2021），说明营养流失改变了微生物生长环境。物理性质变化也很明显，比如培养基分层或出现沉淀，这会让接种环难以挑取均匀菌种。所以实验员要严格按照保存期限使用，发现异常果断弃用。