免疫荧光实验里固定细胞常用的有两种方法，甲醛固定要泡30分钟到两小时，甲醇固定只要泡五到十五分钟。甲醛穿透细胞慢但能长期保存结构，甲醇穿透快但可能让抗体结合变差。比如甲醇固定后抗体反应率可能比甲醛低10%左右，所以得看具体实验需求选哪种。

为啥甲醛固定时间长甲醇固定时间短呢？因为甲醛是缓慢渗透的有机溶剂，需要足够时间把细胞膜打开。比如《分子生物学方法》里说甲醛固定最短30分钟，超过两小时反而可能让细胞结构过度收缩。甲醇虽然能快速溶解脂质膜，但渗透速度是甲醛的3倍以上，所以泡五分钟就够。不过甲醇固定后背景信号会升高15-20%，比如《细胞免疫学实验手册》提到甲醇固定后阴性对照出现假阳性的概率增加。而且甲醇固定后细胞膜皱缩更明显，可能让标记的荧光蛋白显示不均匀，所以有些实验还是得用甲醛。不过现在有改良方法，比如用甲醇固定后加5% BSA缓冲液，能降低背景30%左右。