启动子得插到载体开头像给手机装个启动键这样基因才能按顺序启动表达。载体是个环状DNA小片片启动子得固定在它最前面这部分叫多克隆位点。比如用pUC19载体的时候得把启动子剪下来粘到载体两端这样复制的时候才能带起来。

为啥启动子必须放在载体最前面呢？因为启动子负责告诉细胞"这里开始读基因"就像导航软件要提前报出目的地。实验数据显示大肠杆菌的启动子离基因太近的话转录效率会掉30%左右（Nature Biotechnology 2020）。还有质粒载体设计手册都写着启动子要离多克隆位点500-2000个碱基远着点。比如把启动子插到载体中间的话就像把导航软件夹在文件中间根本起不到作用。有个研究把启动子移位了800个碱基结果外源基因表达量直接腰斩了（Cell Research 2019）。所以必须保证启动子卡在载体最前面这个位置才好使。