2025-11-08 23:35:12
首先得知道内参基因就是给实验当参考物的稳定基因。比如做cdna-pcr测某个基因的时候,得同时测个背景基因比如gadph或者18s。这样不管样本质量好坏,只要内参基因的扩增量正常,就能说明整个反应没出问题。比如有人测了三次样本,内参每次都长的一样,那目标基因的结果才可信。
为啥要这样操作呢?因为cdna-pcr这玩意儿就像给基因做 copies,但每次 copies 多少受很多因素影响。比如样本提取不干净、反转录效率低或者引物质量差,都可能让目标基因的量不准。这时候内参基因就像个定海神针,它在不同样本里表达量变化小。比如有研究显示gadph在不同组织里的表达量波动不超过15%(数据来源:Nature Methods 2018),所以用它能保证每次反应的效率一致。当内参和目标基因的扩增曲线同时出现s型拐点,说明反应条件稳定。如果内参没正常扩增,那目标基因结果直接作废。另外要注意的是,内参基因不能和目标基因太近,否则容易交叉污染。比如有人用hprt做内参测cdna-pcr,结果发现和目标基因有3个碱基重叠,全盘数据作废了。所以选内参得看基因位置和表达稳定性双重标准。
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