2025-11-08 23:35:32
凝胶色谱柱得看样品分子量来选型,柱子孔径得和样品差不多大。比如分子量大的用大孔径柱子,小分子用细孔径的。装柱子前得把柱子冲洗干净,装填时要慢慢加样避免气泡。洗脱的时候先用水洗柱子,再换缓冲液洗脱样品。检测的话用紫外分光光度计或者示差折光仪就行。收尾要倒掉柱子里的液体,防止柱子干裂。
为啥得这么选呢?因为凝胶柱的孔径和分子量成反比,比如200-1000道尔顿的样品常用10-30微米孔径柱子(数据来源:Agilent 2019色谱手册)。装柱子的时候要确保柱子干燥,否则会堵住小孔,洗脱的时候要控制流速,流速太快样品跑太快检测不到。比如装填聚苯乙烯凝胶柱时,若样品分子量是5000道尔顿,得选100-300微米孔径的柱子,这样小分子能进柱子分离。洗脱液流速一般设0.5-1mL/min,这样分离效果最好。倒柱子得慢慢倒,突然倒的话柱子里的凝胶会分层,下次再用就出问题了。
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