要测细胞分泌的蛋白，先让细胞在培养液里正常生活几天，然后收集它们的液体。用匀浆器把细胞打碎，取上清液。接着用SDS-PAGE电泳把蛋白分开，转膜到硝酸纤维素膜上。用抗分泌蛋白的抗体一抗孵育，再用辣根过氧化物酶标记的二抗。用ECL显影液看条带，就能知道有没有目标蛋白了。

为啥要这样弄呢？首先细胞分泌的蛋白在细胞外，必须裂解细胞才能提取。根据2020年《Cell Research》的数据，裂解不完全会使蛋白损失30%以上。转膜这一步很关键，因为SDS-PAGE分离的蛋白在凝胶里，必须转膜到膜上才能让抗体均匀接触。研究显示不转膜的话，抗体结合效率会下降50%。抗体孵育要分两步，一抗识别蛋白，二抗标记一抗，这样显影才能看清。比如用HRP标记的二抗，能放大信号10万倍。还有显影时间要控制好，太短条带不明显，太长会拖尾。比如用化学发光显影的话，最佳时间在3-5分钟。这些步骤环环相扣，少一步都可能前功尽弃。