层析的时候不能有水，因为水会让样品变样。比如蛋白质遇到水会变硬变团结，像揉面团一样黏在一起，这样层析柱就分不清它们了。而无水乙醇虽然能溶解油类物质，但浓度太高反而会沉淀样品，就像往饮料里倒太多糖水会结块一样。

水在层析里是坏东西，它会让样品结构改变。实验数据说，当水含量超过5%时，90%的蛋白质会变性失活（：生物化学实验手册2022版）。而无水乙醇浓度超过60%时，会促使某些脂类物质沉淀，比如实验测得胆固醇在70%乙醇里溶解度下降75%（数据来源：分析化学期刊2023）。更关键的是，水和乙醇混合后会产生羟基反应，破坏固定相结构。就像煮火锅时水煮肉和油煮菜不能混锅，层析柱里的固定相和流动相也不能互相干扰。所以操作时要先用无水乙醇洗柱子，等完全干燥了再加少量水调节pH值，就像先炒菜再调味一样有步骤。