找静脉抽血放管子，加抗凝剂防止凝固。倒进离心管摇匀，转1500转/分钟转20分钟。管底沉淀是死细胞，中间层是目标细胞，上面是血浆。用分液漏斗吸出中间层，加生理盐水洗两遍。数细胞看够不够，不够就重做。

这个流程为啥这样弄呢？首先抽血要选肘静脉，因为血管粗好扎。抗凝剂用肝素或EDTA，这两种最常用，文献说EDTA对细胞活性影响小[1]。离心分三层是因为单个核细胞密度比红细胞高，比血浆低，就像油水混合物分层。分液漏斗吸中间层，是因为密度梯度离心后细胞会聚在特定密度带，漏斗颈能精准收集[2]。洗两遍生理盐水是为了去掉残留的血浆蛋白，避免后续实验干扰。研究显示洗两次后细胞存活率能提高15%[3]。计数用台盼蓝染色，死细胞蓝染不计数，活细胞保持透明。整个流程耗时约2小时，操作失误可能导致细胞污染，所以每一步都要轻拿轻放。