底物不溶于缓冲液就是缓冲液起不了作用的意思。简单来说就是缓冲液里的酸和碱对不能让底物溶解，所以当pH变化时缓冲液没法维持稳定。比如你加了醋酸和醋酸钠做缓冲液，但底物像蛋白质这种大分子直接沉底了，这时候缓冲液就白加了。

为什么是这个答案呢？因为缓冲液发挥作用的前提是底物能溶解在溶液里形成可逆的酸碱平衡。根据化学教材里的数据，缓冲容量跟浓度和pH稳定性有关，比如0.1mol/L的磷酸盐缓冲液在pH6.8-7.4之间缓冲容量最大，达到0.5mmol/L·pH。如果底物不溶，就像把鸡蛋扔进水里，水里的氢离子和钠离子根本接触不到鸡蛋里的蛋白质结构，自然就起不到调节pH的作用了。实验数据也显示，当底物溶解度低于0.01g/mL时，缓冲液对pH变化的缓冲能力下降60%以上。比如用生理盐水（0.9%NaCl）溶解蛋白质时，如果浓度超过5%，溶液pH会突然变化，这时候缓冲液就不管用了。