双内参就是同时用两个内参基因比如Gapdh和GAPDH一个作为参考另一个作为验证这样能提高实验准确度。比如做PCR的时候温度变化试剂用量不同都会影响扩增效果内参基因的作用就是当这些条件不稳定时还能反映出目标基因的真实变化。Gapdh作为管家基因理论上表达稳定但实际操作中发现当样本量少的时候比如10个样本以下Gapdh表达可能不稳定这时候用双内参法就能发现异常值及时排除错误数据。

为什么这样算呢因为内参基因要控制实验误差比如温度变化试剂用量不同导致的误差Gapdh作为管家基因理论上表达稳定但实际操作中发现当样本量少的时候比如10个样本以下Gapdh表达可能不稳定文献显示这时候单内参法误差可达30%以上而双内参法用两个内参比如Gapdh和GAPDH的话误差可以降到5%以内这是因为两个基因同时出现异常的概率非常低所以能提高结果可靠性。比如有研究对比过单内参和双内参法在50个样本中的表现发现当样本量超过20个时双内参法能减少18%的假阳性结果。实验步骤通常是先测两个内参基因的Ct值如果其中一个Ct值异常就说明这个样本有问题需要重做。比如某次实验测出Gapdh的Ct值比正常值高2个循环时研究者果断废弃了该样本数据。