引物温度计算器主要是根据引物长度和GC含量算出熔解温度，比如每增加20个碱基对，Tm值大概升1度，比如GC含量每多10%，Tm也升1度左右。浓度换算是调整引物量到合适范围比如20-50ng/微升，比如用稀释公式算出需要多少原液。比如原液浓度是100mg/毫升，要配到10微升的话，得算出需要0.1微升原液，但实际操作可能用1微升，所以得调整到20微升才能达标。

为什么这么算呢？因为引物温度计算器的基础是碱基配对平衡，比如引物长度每增加20bp，Tm值就+1℃，这是实验室验证过的数据。比如实验室手册写明，50bp的引物Tm是28℃左右，70bp的引物就是34℃左右。浓度换算的原理是C1V1=C2V2，比如100mg/毫升的原液要配到20ng/微升，得算出V1=（20×10）/100000=0.002毫升=2微升。但实际操作中可能误差大，比如多加1微升就会变成25ng/微升，所以得留有余量。比如有人算错了，把100mg的原液直接加到1毫升，结果浓度变成1000μg/毫升，完全不能用。所以得用计算器先算理论值，再根据实际误差调整。比如算出需要2微升原液，实际可能用3微升，这时候得重新算浓度。比如3微升×100000=3000ng，加到98微升就是30ng/微升，还是符合要求的。