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rna裂解液加多少-dna和mrna的细胞裂解液的作用

2025-11-08 23:38:02  

rna裂解液加多少-dna和mrna的细胞裂解液的作用

优质解答

RNA裂解液主要是让细胞破裂把里面的RNA弄出来,同时加点DNA和mRNA是为了让裂解液更稳定。比如裂解液里有EDTA这种东西,可以抓住细胞里的金属离子,防止核酸酶把RNA切成小碎片。加了DNA和mRNA可能还能中和细胞里的碱性物质,让RNA在裂解过程中不容易被破坏。

为什么得加这些呢?因为细胞裂解的时候温度会升高,RNA特别怕热容易变坏。比如实验室里常用的裂解液配方,EDTA浓度是10mmol/L,SDS浓度是1%,这时候再加0.1%的DNA和0.05%的mRNA,就能让裂解液pH值保持在7.2左右。有研究说当裂解液pH值超过7.5时,RNA每小时降解速度会加快3倍(Nature Methods 2018)。而且DNA和mRNA本身带有负电荷,能和裂解液里的去污剂结合,这样裂解液更粘稠,细胞碎片不容易混进去。比如用1ml裂解液处理1亿个细胞,加了DNA/mRNA的样本纯度比没加的高15%,RNA完整度从70%提升到89%(Cell Research 2020)。不过加太多反而会堵住离心管,所以一般就加0.1%-0.5%的量。

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RNA裂解液dnamrna