荧光发光是因为物质吸了光，电子跳到高能级，再回来发光。荧光-荧光基团发光是两个发光基团之间转能量，比如罗丹明和荧光素。这种基团需要距离近，匹配好，比如1-10纳米，量子产率0.1到0.9。

为什么选这些基团？因为它们能量匹配，比如罗丹明发射590nm，荧光素吸收590nm。实验数据说，量子产率0.1到0.9，距离1-10纳米效果最好。比如家兔抗体用Cy5标记，距离3纳米时发光强。所以选基团要看吸收和发射波长是否匹配，距离合适。比如罗丹明标记抗体，荧光素标记蛋白，两者靠近就发光。数据证明，当距离超过10纳米，发光效率降50%以上。所以基团必须靠近，而且波长要配对。比如Cy5和Alexa Fluor 488，波长分别是678nm和548nm，不匹配就不会发光。所以选基团要看两个基团的吸收光谱和发射光谱是否重叠，距离也要控制好。