密度梯度离心就是让混合物在密度变化的液体里慢慢分层。首先准备密度梯度液，比如用蔗糖或PVP溶解，按0-20%、20-40%这样的比例分层装进离心管。然后把样品加到最上面的密度层，盖紧管口固定。接着放进离心机，高速旋转让样品沉到合适位置。打开管口，就能看到不同颜色的分层，比如上层的脂类、中间的蛋白质、下层的细胞核。整个过程大概需要30分钟到2小时，转速通常在15000转每分钟以上。

为什么是这个步骤？因为密度梯度液像楼梯一样，密度越往下越大。样品里的成分密度不同，高速离心时密度小的先沉到低密度层，密度大的留在高密度层。比如红细胞密度1.09g/cm³，会沉到1.08-1.12g/cm³的梯度层。实验数据显示，转速每增加1000转，沉降速度加快3倍，所以用15000转能缩短时间。装样时必须垂直加液，否则气泡会影响分层。离心后静置10分钟再打开，避免震动破坏分层。比如用20%蔗糖梯度分离血清蛋白，白蛋白（密度1.05）沉在上层，球蛋白（密度1.15）沉在下层，中间是纤维蛋白原（密度1.12）。