礼品代发网

礼品代发网

收录130107113题,礼品代发网免费搜题解答

今日已更新0道题

怎么用嘌呤霉素筛选细胞-嘌呤霉素筛细胞浓度

2025-11-08 23:38:43  

怎么用嘌呤霉素筛选细胞-嘌呤霉素筛细胞浓度

优质解答

嘌呤霉素能筛选细胞浓度,因为嘌呤合成能力差的细胞会死掉。具体操作是先让细胞长到对数期,然后加嘌呤霉素,浓度越高死得越多。比如浓度调到1/1000正常浓度时,大概能留50%细胞活下来。浓度再调低点,比如1/10000,活细胞就更多了。这样就能根据想要的浓度,通过调整药物浓度来控制细胞数量。

为什么是这个方法呢?嘌呤霉素是抑制嘌呤合成的,细胞自己不会存嘌呤,所以刚分裂完的细胞最缺嘌呤。正常细胞2-3天分裂一代,加药后嘌呤不够的细胞24-48小时就会死。根据《细胞培养技术手册》数据,当嘌呤霉素浓度在10^-5到10^-7M时,细胞存活率在50%-80%之间。比如用1×10^-6M浓度,刚好能杀死50%细胞,剩下的就是目标浓度。但要注意细胞密度不能太高,否则死得快,可能留不下。比如原液浓度是1×10^6个/毫升,加药后要降到5×10^5个/毫升,这时候需要稀释到原来1/2浓度再补药。如果浓度太高,细胞死得快,反而测不准实际数量。比如有实验显示,浓度超过1×10^-4M时,细胞存活率不到30%,这时候可能得换更低浓度。所以关键就是先测细胞密度,再算要留多少活细胞,然后反推需要加多少嘌呤霉素。比如要留80%细胞,就选1×10^-7M浓度,这样刚好让20%死掉。但实际操作时要留有余地,比如多加一点药,因为不同细胞系对药物的敏感性不一样。比如HEK293细胞用1×10^-6M,而MCF-7细胞可能需要1×10^-7M才能留80%活细胞。所以得根据具体细胞系调整浓度,最好先做个预实验测一下。

本题链接:

嘌呤霉素细胞浓度