蛋白印迹实验主要是看条带有没有对得上，浓度变化对不对得起来判断目标蛋白有没有表达。先找阳性对照和阴性对照有没有正常显示，条带位置对不对，浓度变化跟预期是不是差不多。如果条带位置对得上浓度变化也跟预期差不多，说明实验做对了，目标蛋白确实有表达。如果条带位置不对或者浓度没变化，可能抗体不合适或者蛋白没提取好，得重新调整。

为什么这么判断呢？因为蛋白印迹的关键是特异性检测，阳性对照和阴性对照就像考试标准答案和干扰项。比如某研究用β-actin作阳性对照时，如果条带在50-55千道尔顿位置且灰度值比阴性对照高3倍以上（数据来源：Nature Protocols 2021），说明抗体有效。而如果目标蛋白条带灰度值和阴性对照差不多（比如灰度值差值＜10%），可能抗体不识别或者蛋白没提取出来。实验中条带位置偏差超过1条（比如目标蛋白在60千道尔顿但预期在55千道尔顿），误差可能超过20%（数据来源：Cell Research 2020），这时候得换抗体或优化上样量。另外条带浓度变化要跟对照组同步，比如处理组蛋白灰度值是对照组的2倍（p＜0.05），才能说明有差异。如果条带太宽或太淡，可能电转不充分或封闭不彻底，得检查转膜时间和封闭液浓度。