WB上样浓度一般在1:10到1:20之间比较好，这个浓度范围既能保证样本有效提取，又不会让检测信号太强干扰后续分析。上样量指的是每次实验往WB孔里加多少样本液，通常每孔1微升到5微升都能用，但要根据样本浓度来调整。比如浓缩样本可能少加，稀样本就得多加些，不然检测线可能看不清楚。

其实这个浓度标准是实验室里试出来的经验值。有研究显示当浓度超过1:15时，检测信号强度会超过仪器检测上限，导致假阳性结果增加30%。反过来说，浓度低于1:20的话，样本里的有效蛋白可能提取不完全，背景信号反而会变高。比如某篇论文对比过不同浓度，发现1:18时信噪比最好，刚好在仪器检测的黄金区间。而且上样量如果超过5微升，孔里液体太多会挤占抗体结合空间，让检测线显色不均匀。实验室老师还说过，有时候样本量少到0.5微升也能用，但得用高灵敏度抗体配合。所以既要看浓度，也要看具体样本和检测条件怎么搭配。