Western Blot上样量一般选50-100微克每孔比较合适。这得看蛋白浓度和细胞数量，浓度高的少上点，浓度低的得多上点。比如转染细胞和原代细胞上样量就不一样，转染的可能50微克够，原代细胞得100微克。还要注意抗体灵敏度和膜尺寸，大膜多上点，小膜少上点。

为啥是这个数呢？首先细胞裂解后总蛋白量不同，比如转染细胞每孔30微克就够，但原代细胞裂解后总蛋白少，得补到100微克。有研究显示细胞数少时上样量要翻倍，比如10^6细胞裂解液上样50微克，10^5细胞得100微克。文献里说抗体检测下限是0.1微克，所以上样量得超过这个数。比如用ECL显影的话，50微克刚好在检测线附近，100微克又怕信号太强。膜尺寸影响也大，30cm²的膜上样100微克，20cm²的膜只能上50微克。有个实验对比过，上样量少20%时条带弱一半，多20%信号过曝。所以得根据具体情况调整，但50-100微克是常见范围。