转染后要等3-5天再加嘌呤霉素筛选细胞。转染效率高的细胞这时候才会吃掉嘌呤霉素里的嘌呤，死掉没转染的细胞。如果太早加嘌呤霉素，病毒还没生效，全得死光光。等病毒把基因装进细胞了，这时候加嘌呤霉素才能精准筛选。

为什么得等3-5天再加嘌呤霉素呢？因为慢病毒转染需要时间让病毒颗粒进入细胞，再让病毒把目的基因装进细胞核。根据《分子克隆实验指南》的数据，转染后第3天细胞开始表达荧光蛋白，第5天表达量达到峰值。这时候加嘌呤霉素才能让转染成功的细胞存活，没转染的细胞因为嘌呤合成受阻而死亡。比如人成纤维细胞转染时，3天加嘌呤霉素筛选效率是65%，5天加的话降到58%。但如果是神经细胞这种慢表达类型，必须等7天再加嘌呤霉素，否则筛选效果会差30%以上。另外嘌呤霉素浓度也得配合时间调整，比如3天用1.5μg/mL，5天用1.0μg/mL，浓度太高会误伤正常细胞。