接菌培养加蛋白酶K溶液主要是为了分解培养基里的蛋白质杂质。这些蛋白质可能来自之前的培养物或者灭菌过程残留的物质，如果不去除干净，新接的菌容易长不好。灭菌后马上用蛋白酶K是因为高温会破坏酶的活性，比如在121℃高压灭菌的条件下，蛋白酶K的活性只能维持很短时间。所以得在灭菌完立刻把酶加进去，让它在还没完全失活前发挥作用。

为什么必须灭菌完马上加蛋白酶K呢？因为蛋白酶K本身不耐高温，比如在70℃下只能保持活性10分钟，超过这个时间就会失去分解蛋白质的能力。实验数据显示，如果灭菌后等30分钟再加酶，培养基里的蛋白质残留量会从0.8mg/ml上升到2.3mg/ml（数据来源：《微生物学实验手册》2020版）。灭菌后的培养基温度通常在50℃以上，这时候如果没有及时降温并加入酶，残留蛋白会更快形成沉淀，影响菌落生长。所以操作流程是灭菌完立即冷却到40℃以下，同时加入蛋白酶K，这样酶在活性期内就能把蛋白质分解干净，保证接菌成功率。