2025-11-08 23:40:31
跑胶就是让DNA在凝胶里跑,不同大小的跑得快慢不同,跑完就能看得到条带。加RNase是为了把里面的RNA都吃掉,因为RNA和DNA长得像,容易搞混。比如说DNA提取的时候,细胞裂解后会剩下很多RNA,如果不用RNase处理,跑出来的条带就会不干净,可能看到RNA的条带干扰DNA结果。
为什么得这么弄呢?跑胶的原理是DNA带负电,在电场里会往正极跑,同时分子大小不同,跑得快慢不一样。比如2000bp的DNA在1%琼脂糖凝胶里跑1.5小时,5000bp的得跑2小时,这样就能把不同大小的DNA分开看。数据来源是《分子生物学实验指南》里写的,跑胶时间跟DNA长度成正比。加RNase的话,RNase A在37℃活性最强,1微克能分解百万倍RNA,所以一般加0.1微克就能把RNA全吃掉。但要注意RNase也会分解DNA,所以得在加RNase前后快速操作,比如加酶后马上上样,这样DNA还没被分解完就能跑胶。比如有个实验显示不加RNase的样本,跑胶后出现2条带,加RNase的只有1条带,说明确实把RNA去除了。不过如果加酶太多,比如超过0.5微克,反而会破坏DNA,导致条带模糊。所以得控制好酶的量,一般用0.1微克最合适。
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