显微镜要调焦才能看清标本细节，因为光线从下往上经过物镜和目镜时，会因距离变化导致图像模糊。比如用10倍物镜观察时，如果直接看载玻片，光线会从载玻片下方斜射上去，经过物镜折射后焦点偏移，这时候需要转动调焦旋钮让物镜缓慢上升，直到光线垂直穿过物镜的中央光路，这样标本的反射光才能准确落在目镜的视场光阑上。

为什么必须自下而上调节呢？因为显微镜的光路设计是光线从载物台下面向上传播的。假设物镜焦距是16毫米，当载玻片距离物镜筒壁5毫米时，物镜实际工作距离只有11毫米，这时候如果调焦旋钮突然向下压，物镜会撞击载玻片，导致镜头划伤。实验数据显示，显微镜的物镜和目镜组合后，理想的工作距离是12-18毫米，必须通过调焦旋钮让物镜以每圈0.5毫米的速度匀速上升，同时目镜保持固定，这样光线才能在进入人眼前完成两次聚焦。比如用40倍物镜时，如果调焦旋钮逆时针转两圈，物镜会上升1毫米，刚好让标本的反射光从边缘光路变成中央光路，这时候再配合目镜的视场光阑调整，就能看到清晰的标本结构。但要注意的是，如果调焦旋钮突然向下转动，物镜会以每圈0.5毫米的速度快速下降，这时候物镜筒和载物台之间的空隙会小于5毫米，导致光线无法垂直穿过物镜的中央光路，所以必须自下而上调节。