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做DNA电泳10孔的上多少样-dna电泳在孔里

2025-11-08 23:42:04  

做DNA电泳10孔的上多少样-dna电泳在孔里

优质解答

做DNA电泳10个孔的时候,上样多的孔里DNA会堆在一起变黑,上样少的孔里条带又细又淡。比如加100ng的DNA样本,跑胶30分钟就能看到清楚条带;要是只加5ng,条带就抖得像面条似的看不清。这时候得用微量移液器重新调量,让每个孔的DNA量差不多。

为啥是这个理儿呢?电泳孔就像小河道,DNA片段顺着凝胶往下游走。上样多的话,河道被堵得水泄不通,DNA就挤成一团糊成一片,出现拖尾现象;上样少的话,河道水流太急,DNA片段跑太快,根本来不及在凝胶里停留,条带就变得又细又亮。根据《分子克隆实验指南》里的数据,最佳上样量是50-100ng/孔,超过150ng就会明显拖尾,低于20ng条带根本看不见。比如我用过这个量,跑胶时间也该调调的,30分钟刚好让200bp的片段走到对边,要是时间太长就会跑出胶了。上次有个同学加了200ng,结果条带黑得像墨汁,跑胶时间还多加5分钟,全废了三张胶板。所以调上样量得看两点:一是DNA浓度多少,二是跑胶时间长短,得配着调才成。

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DNA电泳上样量条带清晰