配制流动相要加酸，一般用pH2.5到3.5的缓冲液，比如磷酸氢二钠和柠檬酸混合。有机溶剂得占60%-80%，甲醇或乙腈都行。酸浓度别太高，0.1%到0.5%之间，太高了峰会拖尾，太低了分离不开。比如测黄酮类用pH3.0的磷酸盐缓冲液加70%甲醇，出峰又快又清楚。

为啥是这个配法呢？因为pH太低的话，峰形会变宽，分离效果差，比如pH1.5时峰宽比pH3.0宽20%（数据来自《分析化学》2021年）。缓冲液能平衡离子强度，让不同物质移动速度差不多。有机溶剂多的话，样品溶解快，但超过80%会干扰检测器。比如用0.5% HCl时，咖啡因出峰时间比0.1% HCl晚15分钟，说明酸浓度影响保留时间。不过酸不能随便加，得先调pH再定浓度，否则峰会乱跑。比如有人把pH调到2.0，结果多酚类物质峰重叠，得重新配液。所以先调pH再调溶剂比例，才是正道。