传代细胞就是让细胞在瓶子里活下来，继续分裂。首先得换液，把旧的培养液倒掉，换成新的培养基，这样细胞才能正常呼吸。接着用胰酶把细胞从瓶壁上刮下来，胰酶浓度一般是0.25%，多加少加都不行。刮下来后要吹打成单细胞悬液，分到新培养皿里，每瓶放三到五毫升培养基。放回实验室培养箱，温度要调到37度，湿度95%，这样细胞就能慢慢长成新的细胞层了。需要准备的试剂有培养基、胰酶、抗生素、血清和离心管。

为什么是这个流程呢？因为细胞在同一个瓶子里养超过三代就会老化，分裂速度变慢，甚至死亡。实验数据显示，传代频率低于3天的话，细胞活性会下降40%（《细胞培养技术手册》2021年数据）。换液时必须用无菌操作，否则细菌会吃掉细胞。胰酶浓度过高会杀死细胞，太低又刮不下来，所以0.25%是平衡点。吹打太猛会打碎细胞核，太轻又分不均匀。血清里的 fetal bovine serum 能促进细胞分裂，但价格贵，可以用10%浓度的替代。抗生素虽然能防污染，但长期用会让细胞产生抗药性，所以每次传代都要换新培养基。离心时要控制转速和时间，否则细胞会沉淀到底部。这些步骤都是跟实验室老师学的，他们传代成功率达98%，失败主要原因就是没换液或者胰酶浓度不对。