用NCBI或者引物设计软件查序列直接就能看到引物两端的碱基排列顺序，要找TM值的话先算引物长度再查公式里的Tm值计算方法。比如用Primer3软件输入序列后自动显示熔解温度，或者用在线工具输入序列长度和GC含量就能算出大概数值。

为什么得这么做呢？因为蛋白引物序列得从基因数据库里找或者自己设计，像NCBI这样的平台有大量已知基因的序列记录。而TM值代表引物和DNA结合的温度，太低容易漏结合，太高又容易非特异性结合。根据文献记载，一般引物TM值要在50到65℃之间才合适，比如《分子克隆实验指南》里提到，当引物长度超过25个碱基时，用(2'(A+T)+(3'(G+C))/length×100公式算出的Tm值更准确。所以得先查序列再算温度，就像先量尺寸再裁布一样有道理。