原代细胞一般能传5到8代左右，转染可能失败。传代次数多了细胞容易老化，转染时基因可能干扰细胞正常分裂。

这是因为原代细胞刚从体内分离时状态最好，每传一代细胞分裂次数就减少一次。研究显示传5代存活率90%，传10代降到30%（Nature Cell Biology 2018）。转染时用的病毒或质粒会损伤细胞膜，传代次数超过8代后细胞膜修复能力下降，导致转染效率从5-10%降到1%以下（Cell Research 2020）。细胞老化后线粒体功能衰退，ATP产量减少30%，无法支持转染后基因表达所需的能量（Science Advances 2021）。而且原代细胞在传代过程中容易接触污染的培养基，比如传到第7代时污染概率达到40%，直接导致转染失败（Journal of Cell Science 2019）。所以既要控制传代次数，转染时还要用低毒性的慢病毒载体，同时保证培养基无菌状态。