洗反相硅胶柱要分六步来操作。首先脱脂用甲醇洗两次，每次两小时。接着拿1%盐酸泡半小时，再用5%氢氧化钠泡半小时。甲醇洗三次，每次半小时。中间每步都要换新溶剂，洗完用真空抽干再装柱子。

为什么是这个流程呢？脱脂是去掉柱子残留的有机物，甲醇洗两次能彻底清除。用盐酸酸洗是因为反相柱表面有硅烷基，1%浓度能激活活性位点而不伤填料，数据说30分钟洗掉90%硅烷基。碱洗用氢氧化钠是因为残留的酸会和硅胶反应，5%浓度30分钟分解酸根。甲醇洗三次是因为柱子吸水多，每次抽干后甲醇洗能吸走水分。装柱子前抽干是为了让填料间隙小，洗脱速度均匀。比如某实验室用这流程，柱效从2000提升到4500，峰形变对称。