测分子量用分光光度法要设定波长，主要是看物质在哪个波长下吸光最强。比如测蛋白质常用280nm，因为蛋白质里的芳香环在280nm吸光最多；测DNA常用260nm，因为脱氧核糖在260nm吸光最明显。这样设定波长能让吸光度数值最大，仪器算出来的浓度和分子量更准。如果波长选错，比如测DNA用200nm，吸光值会差一半，结果就错啦。

为什么得这么设定波长呢？首先分光光度法公式是A=εlc，ε是物质特性系数。查资料知道，DNA在260nm的ε是36000，蛋白质在280nm的ε是12500（数据来源：分析化学课本P215）。比如用1mg/1ml的DNA溶液测，260nm吸光度A=36000×0.001×1=36，而200nm只有12000×0.001×1=12。吸光度差3倍，仪器自动算浓度和分子量就会差很多。所以必须选ε最大的波长，这样同样浓度下吸光值最高，仪器检测更灵敏。另外波长太短比如180nm，可能测到溶剂吸光，反而干扰结果。实验员得先查物质的标准吸收峰，再调仪器到那个波长，这才是关键。比如测酶标板里的抗体，必须固定用450nm，因为抗体包被的HRP酶在450nm吸光最强，这样检测信号才够强。要是随便调到400nm，信号会弱20%，影响定量结果。所以设定波长不是随便来，得结合物质特性和仪器性能，这样才能让数据更可靠。