2025-11-08 23:46:29
转染效率就是看细胞里带报告基因的细胞占多少比例。一般用荧光显微镜看绿色或红色发光的细胞,或者用qPCR测基因表达量。比如有人用293细胞转染后,1000个细胞里200个发光,效率就是20%。简单说就是算成功转染的细胞占多少
为什么是这个答案呢?因为转染效率直接关系到实验结果可靠性。根据《分子细胞生物学实验指南》数据,常规转染效率在10%-70%之间,太低(比如<5%)说明转染失败,太高(>80%)可能细胞毒性大。比如用Lipofectamine 2000转染HEK293细胞时,最佳效率是30%-50%,这时候荧光显微镜下每视野有5-10个亮斑,qPCR测到的报告基因Ct值在20-25之间。如果转染后只有3个亮斑或者Ct值>28,说明效率低。转染试剂用量、质粒浓度、细胞密度都会影响效率,比如质粒浓度多1倍,效率可能从15%升到35%。所以要看荧光显微镜的亮斑数量和qPCR数据,这两个方法结合起来最准。不过有时候细胞贴壁不好,或者转染时间太短,也会让亮斑少,这时候得调整条件再试。
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