WB实验就是用外泌体做蛋白质检测。首先得把外泌体从细胞里分离出来，然后跑胶电泳看蛋白质条带。接着把胶转膜到硝酸纤维素纸上，用抗体一抗二抗孵育，用化学发光显影。整个过程要控制离心时间转速，比如分离外泌体用12000转30分钟，转膜1小时，抗体浓度1:1000。

为什么这么操作呢？因为外泌体体积小容易漏出，离心能浓缩样品。跑胶电泳能按分子量分开蛋白质，转膜让抗体更好结合。抗体浓度太高会假阳性，太低检测不到。比如离心转速低于10000转可能沉淀细胞碎片，高于15000转会损失外泌体。转膜时间太短胶没完全贴膜，太长会破坏蛋白。实验数据表明，12000转30分钟分离纯度达85%，1:1000抗体浓度结合效率最高。但有人发现转膜后用封闭液30分钟能减少背景，这可能是优化点。显影时间3-5分钟，太短信号弱，太长会过曝。有人用ECL显影液比化学发光更稳定，但成本高。